فلورسنس فلٽر فلورسنس خوردبيني ۾ هڪ لازمي جزو آهي. هڪ عام سسٽم ۾ ٽي بنيادي فلٽر آهن: هڪ جوش فلٽر، هڪ اخراج فلٽر ۽ هڪ ڊيڪروڪ آئيني. اهي عام طور تي هڪ ڪعب ۾ ڀريل هوندا آهن ته جيئن گروپ کي گڏ ڪيو وڃي خوردبيني ۾.
فلورسنس فلٽر ڪيئن ڪم ڪندو آهي؟
حوصلہ افزائي فلٽر
Excitation فلٽر هڪ مخصوص موج جي روشني کي منتقل ڪن ٿا ۽ ٻين موج جي ڊيگهه کي بلاڪ ڪن ٿا. اهي مختلف رنگ پيدا ڪرڻ لاء استعمال ڪري سگھجن ٿيون فلٽر کي ترتيب ڏيڻ جي ذريعي صرف هڪ رنگ جي اجازت ڏيڻ لاء. اتساهه جا فلٽر ٻن مکيه قسمن ۾ اچن ٿا - ڊگهو پاس فلٽر ۽ بينڊ پاس فلٽر. ايڪسائيٽر عام طور تي هڪ بينڊ پاس فلٽر هوندو آهي جيڪو صرف فلوروفور جي جذب ڪيل موج جي طول و عرض مان گذري ٿو، اهڙيءَ طرح فلوروسينس جي ٻين ذريعن جي اتساهه کي گھٽائي ٿو ۽ فلوروسينس ايميشن بينڊ ۾ جوش جي روشني کي روڪي ٿو. جيئن تصوير ۾ نيري لڪير مان ڏيکاريل آهي، BP 460-495 آهي، جنهن جو مطلب آهي ته اهو صرف 460-495nm جي فلوروسنس مان گذري سگهي ٿو.
اهو هڪ فلوروسينس خوردبيني جي روشني واري رستي جي اندر رکيل آهي ۽ فلوروفور ايڪسائيٽيشن رينج کانسواءِ روشني جي ذريعن جي سڀني موج جي طول و عرض کي فلٽر ڪري ٿو. فلٽر گھٽ ۾ گھٽ ٽرانسميشن تصويرن جي چمڪ ۽ چمڪ کي ترتيب ڏئي ٿو. ڪنهن به اتساهه واري فلٽر لاءِ گهٽ ۾ گهٽ 40٪ ٽرانسميشن جي سفارش ڪئي وئي آهي جيئن ٽرانسميشن مثالي طور تي> 85٪. ايڪسائيٽيشن فلٽر جي بينڊوڊٿ مڪمل طور تي فلوروفور ايڪسائيٽيشن رينج جي اندر ھجڻ گھرجي جيئن فلٽر جي سينٽر واول ويٿ (CWL) فلوروفور جي چوٽي جوش واري موج جيتري ممڪن حد تائين ويجھي ھجي. excitation فلٽر آپٽيڪل density (OD) پس منظر جي تصوير جي اونداھي کي ترتيب ڏئي ٿو. OD هڪ ماپ آهي ته فلٽر ڪيتري حد تائين ٽرانسميشن رينج يا بينڊوڊٿ کان ٻاهر موج جي ڊيگهه کي بلاڪ ڪري ٿو. گھٽ ۾ گھٽ OD 3.0 جي سفارش ڪئي وئي آھي پر ھڪڙو OD 6.0 يا وڌيڪ مثالي آھي.
اخراج فلٽر
اخراج فلٽر مقصد جي خدمت ڪن ٿا مطلوب فلورسنس کي نموني مان ڊيڪٽر تائين پهچڻ جي اجازت ڏيڻ. اهي ننڍيون موج جي ڊيگهه کي بلاڪ ڪن ٿا ۽ ڊگهي موج جي لاء اعلي ٽرانسميشن آهن. فلٽر جو قسم پڻ ھڪڙي نمبر سان جڙيل آھي، مثال طور BA510IF شڪل ۾ (مداخلت واري رڪاوٽ فلٽر)، اھو نامزدگي ان جي وڌ ۾ وڌ ٽرانسميشن جي 50٪ تي موج جي ڊيگهه ڏانھن اشارو ڪري ٿو.
اتساهيندڙ فلٽرن لاءِ ساڳيون سفارشون اخراج فلٽرن لاءِ صحيح آهن: گھٽ ۾ گھٽ ٽرانسميشن، بينڊوڊٿ، او ڊي، ۽ CWL. مثالي CWL، گھٽ ۾ گھٽ ٽرانسميشن، ۽ OD ميلاپ سان گڏ هڪ اخراج فلٽر تمام گهڻي ممڪن بلاڪنگ سان گڏ، تمام روشن ممڪن تصويرون مهيا ڪري ٿو، ۽ تيز ترين اخراج سگنلن جي سڃاڻپ کي يقيني بڻائي ٿو.
Dichroic Mirror
ڊيڪروڪ آئيني کي ايڪسائيٽيشن فلٽر ۽ ايميشن فلٽر جي وچ ۾ 45° جي زاويي تي رکيل آهي ۽ فلوروفور جي طرف جوش جي سگنل کي ظاهر ڪري ٿو جڏهن ته اخراج سگنل کي ڊيڪٽر ڏانهن منتقل ڪري ٿو. مثالي ڊيڪروڪ فلٽر ۽ بيم اسپلٽرز ۾ وڌ کان وڌ ريفريڪشن ۽ وڌ ۾ وڌ ٽرانسميشن جي وچ ۾ تيز ٽرانزيڪشن هوندي آهي، ايڪسائيٽيشن فلٽر جي بينڊوڊٿ لاءِ>95% ريفريڪشن ۽ ايميشن فلٽر جي بينڊوڊٿ لاءِ>90% جي ٽرانسميشن سان. فلٽر چونڊيو فلوروفور جي چونڪ واري ويڪرائي ڦاڪ (λ) کي ذهن ۾ رکي، گھٽ ۾ گھٽ گھٽ ڪرڻ لاءِ گم ٿيل روشني ۽ وڌ ۾ وڌ فلورسنٽ تصويري سگنل کان شور جي نسبت.
هن شڪل ۾ ڊيڪروڪ آئيني DM505 آهي، تنهنڪري اهو نالو ڏنو ويو آهي ڇاڪاڻ ته 505 نانو ميٽر هن آئيني جي وڌ ۾ وڌ ٽرانسميشن جي 50٪ تي موج جي ڊيگهه آهي. هن آئيني لاءِ ٽرانسميشن وکر 505 nm کان مٿي اعليٰ ٽرانسميشن ڏيکاري ٿو، 505 نانو ميٽر جي کاٻي طرف ٽرانسميشن ۾ هڪ تيز ڦوٽو، ۽ 505 نانو ميٽر جي کاٻي ڏانهن وڌ کان وڌ عڪاسي ڏيکاري ٿو پر اڃا به ڪجهه ٽرانسميشن 505 nm کان هيٺ ٿي سگهي ٿي.
ڊگهو پاس ۽ بينڊ پاس فلٽر جي وچ ۾ ڇا فرق آهي؟
فلورسنس فلٽر ٻن قسمن ۾ ورهائي سگھجن ٿا: ڊگھي پاس (LP) ۽ بينڊ پاس (BP).
لانگ پاس فلٽر ڊگھي موج کي منتقل ڪن ٿا ۽ ننڍن کي بلاڪ ڪن ٿا. ڪٽ آن موج جي ڊيگهه 50٪ چوٽي ٽرانسميشن جي قيمت آهي، ۽ ڪٽ آن جي مٿان مڙني موج جي ڊيگهه لانگ پاس فلٽر ذريعي منتقل ڪئي ويندي آهي. اهي اڪثر ڪري dichroic آئيني ۽ اخراج فلٽر ۾ استعمال ٿيندا آهن. لانگ پاس فلٽر استعمال ٿيڻ گهرجن جڏهن ايپليڪيشن کي وڌ ۾ وڌ اخراج گڏ ڪرڻ جي ضرورت هجي ۽ جڏهن اسپيڪٽرل تبعيض گهربل يا ضروري نه هجي، جيڪو عام طور تي جانچ جي صورت ۾ هوندو آهي جيڪو نمونن ۾ هڪ واحد خارج ڪندڙ نسل پيدا ڪري ٿو پس منظر آٽو فلوروسينس جي نسبتا گهٽ سطح سان.
بينڊ پاس فلٽر صرف هڪ خاص موج جي بينڊ کي منتقل ڪن ٿا، ۽ ٻين کي بلاڪ ڪن ٿا. اهي فلوروفور اخراج اسپيڪٽرم جي صرف مضبوط حصي کي منتقل ڪرڻ جي اجازت ڏيندي crosstalk کي گهٽائي ڇڏيندا آهن، آٽو فلوروسينس شور کي گهٽائيندا آهن ۽ اهڙيءَ طرح تيز پس منظر آٽو فلوروسينس نمونن ۾ سگنل کان شور جي تناسب کي بهتر بڻائيندا آهن، جيڪي ڊگهو پاس فلٽر پيش نٿا ڪري سگهن.
ڪيترين قسمن جا فلورسنس فلٽر سيٽ BestScope فراهم ڪري سگھن ٿا؟
فلٽرن جي ڪجھ عام قسمن ۾ نيرو، سائو ۽ الٽراوائلٽ فلٽر شامل آھن. جيئن ٽيبل ۾ ڏيکاريل آهي.
| فلٽر سيٽ | حوصلہ افزائي فلٽر | Dichroic Mirror | رڪاوٽ فلٽر | LED چراغ موج جي ڊيگهه | درخواست |
| B | BP460-495 | ڊي ايم 505 | BA510 | 485nm | · FITC: فلورسنٽ اينٽي باڊي جو طريقو · ايسڊائن نارنگي: ڊي اين اي، آر اين اي اورامين: Tubercle bacillus · EGFP، S657، RSGFP |
| G | BP510-550 | ڊي ايم 570 | BA575 | 535nm | روڊامائن، TRITC: فلورسنٽ اينٽي باڊي جو طريقو پروپيڊيم آئوڊائڊ: ڊي اين اي · آر ايف پي |
| U | بي پي 330-385 | ڊي ايم 410 | بي اي 420 | 365nm | · خودڪار فلورسنس مشاهدو DAPI: ڊي اين اي جو داغ · Hoechest 332528, 33342: Chromosome staining لاءِ استعمال ٿيل |
| V | بي پي 400-410 | ڊي ايم 455 | بي اي 460 | 405nm | · ڪيٽيچولامائنس · 5-هائيڊروڪسي ٽريٽاامين · Tetracycline: کنڊ، ڏند |
| R | بي پي 620-650 | ڊي ايم 660 | BA670-750 | 640nm | · Cy5 · Alexa Fluor 633، Alexa Fluor 647 |
فلٽر سيٽ جيڪي fluorescence حاصلات ۾ استعمال ڪيا ويا آهن فلوروسينس ايپليڪيشنن ۾ استعمال ٿيندڙ وڏي موج جي چوڌاري ٺهيل آهن، جيڪي سڀ کان وڌيڪ استعمال ٿيل فلوروفورس تي ٻڌل آهن. انهي سبب لاء، اهي پڻ فلوروفور جي نالي سان نالا رکيا ويا آهن انهن جو مقصد تصويرن جي لاء آهي، جهڙوڪ DAPI (نيري)، FITC (سائي) يا TRITC (ڳاڙهي) فلٽر ڪيب.
| فلٽر سيٽ | حوصلہ افزائي فلٽر | Dichroic Mirror | رڪاوٽ فلٽر | LED چراغ موج جي ڊيگهه |
| FITC | BP460-495 | ڊي ايم 505 | BA510-550 | 485nm |
| ڊي پي آءِ | بي پي 360-390 | ڊي ايم 415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | BP528-553 | ڊي ايم 565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-Auramine | بي پي 470 | ڊي ايم 480 | بي اي 485 | 450nm |
| ٽيڪساس لال | BP540-580 | ڊي ايم 595 | BA600-660 | 560nm |
| م چيري | BP542-582 | ڊي ايم 593 | BA605-675 | 560nm |
توهان هڪ فلورسنس فلٽر ڪيئن چونڊيو ٿا؟
1. fluorescence فلٽر چونڊڻ جو اصول اهو آهي ته فلورسنس/اخراج جي روشني کي ممڪن حد تائين امڪاننگ جي آخر مان گذرڻ ڏيو، ۽ مڪمل طور تي هڪ ئي وقت ۾ جوش واري روشني کي بلاڪ ڪيو وڃي، جيئن بلند ترين سگنل کان شور جي تناسب حاصل ڪرڻ لاء. خاص طور تي multiphoton excitation ۽ کل اندروني عڪاسي خوردبيني جي ايپليڪيشن لاء، ڪمزور شور پڻ امڪاني اثر ۾ وڏي مداخلت جو سبب بڻجندو، تنهنڪري سگنل جي ضرورت کان وڌيڪ شور جي تناسب جي ضرورت آهي.
2. فلوروفور جي جوش ۽ اخراج اسپيڪٽرم کي ڄاڻو. هڪ فلوروسينس فلٽر سيٽ ٺاهڻ لاءِ جيڪو ڪارو پس منظر سان هڪ اعليٰ معيار جي، اعليٰ ڪنٽراسٽ تصوير ٺاهي، اتساهه ۽ اخراج جي فلٽرن کي انهن علائقن تي گهٽ ۾ گهٽ پاسبينڊ ريپل سان اعليٰ ٽرانسميشن حاصل ڪرڻ گهرجي جيڪي فلوروفور ايڪسائيٽيشن چوٽي يا اخراج سان ملن ٿا.
3. فلورسنس فلٽر جي استحڪام تي غور ڪريو. اهي فلٽر تيز روشنيءَ جي ذريعن کان بي اثر هجڻ گهرجن جيڪي الٽرا وائلٽ (UV) روشني پيدا ڪن ٿيون جيڪي ”برن آئوٽ“ جو سبب بڻجي سگهن ٿيون، خاص طور تي ايڪسائيٽر فلٽر جو جيئن ته اهو روشنيءَ جي ذريعن جي مڪمل شدت سان مشروط آهي.
مختلف فلورسنٽ نموني تصويرون
وسيلا گڏ ڪيا ويا آهن ۽ انٽرنيٽ تي منظم ڪيا ويا آهن، ۽ صرف سکيا ۽ مواصلات لاء استعمال ڪيا ويا آهن. جيڪڏهن ڪو به خلاف ورزي آهي، مهرباني ڪري اسان سان رابطو ڪريو حذف ڪرڻ لاء.
پوسٽ ٽائيم: ڊسمبر-09-2022